三分類血液分析儀的檢測法

1多角度激光偏振光散射檢測法

采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋,，稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),，只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下．從細(xì)胞中分離出來,。而鞘流的水分則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)．使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,，它與鞘流的折光系數(shù)相同，不影響白細(xì)胞的檢測,。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來檢測通過激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光,，因?yàn)榧?xì)胞大小,、折射指數(shù)、核形,、核漿比率以及顆粒性質(zhì)等,，均可影響在不同角度測得的散射光量。

2 電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測法

這方法是分別采用四個(gè)檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細(xì)胞① 淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解,，而使白細(xì)胞保持完整，細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài),，當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測系統(tǒng)時(shí),，對白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法和射頻電導(dǎo)法的聯(lián)合檢測，結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體,。② 嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血?jiǎng)人嵝约?xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外,，其他細(xì)胞均被溶解或萎縮．再對保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),。③幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同,，結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多．且對溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí)．成熟細(xì)胞被溶解，只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計(jì)數(shù),。

3電阻抗,、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測法即庫爾特公司的VCS技術(shù)．根據(jù)流體力學(xué)的原理，應(yīng)用鞘流技術(shù)使溶血后剩余的白細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞單個(gè)通過檢測器,，接受VCS三種技術(shù)的同時(shí)檢測,，完成白細(xì)胞分類過程。

4 光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合檢測法

利用光散射的原理計(jì)數(shù)血細(xì)胞,，因細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)不同,，在不同角度上散射光有差別，有助于對白細(xì)胞的區(qū)分,。白細(xì)胞化學(xué)染色即是在稀釋液中加入過氧化酶(MPO)的底物及現(xiàn)色劑,，根據(jù)白細(xì)胞對MP0的反應(yīng)分類。中性細(xì)胞MP0 為強(qiáng)陽性,，嗜酸性細(xì)胞陽性更強(qiáng),，單核細(xì)胞為弱陽性，淋巴細(xì)胞性,，嗜堿性細(xì)胞亦為陰性,，故綜合光散射和細(xì)胞化學(xué)染色的特點(diǎn)，在電腦顯示屏上可得到類似流式細(xì)胞儀的二維或三維圖像一一不同顏色的散點(diǎn)圖．并可打出分類結(jié)果,。由于嗜堿性細(xì)胞不含此酶,，不能被檢測．

試劑的選用

的測定原理大多為電阻法,，因此其所用細(xì)胞稀釋試劑應(yīng)為導(dǎo)電性良好的電解質(zhì)液體。同時(shí)也要考慮細(xì)胞的收縮與擴(kuò)大問題,，為了不使細(xì)胞擴(kuò)大到破裂,，液體應(yīng)為等滲或高滲溶液。溶血?jiǎng)┮紤]用什么表面活性劑成分來溶解紅細(xì)胞,，并使對環(huán)境污染最小,，且能有效保護(hù)白細(xì)胞。清潔劑要考慮用那一種清潔劑清洗管道,，且腐蝕管道可能最小。查閱,、累積儀器測定RBC,WBC,PLT的各種試劑配方,，并歸類，這樣容易找出3種試劑的各自關(guān)系和內(nèi)在聯(lián)系,。運(yùn)用你能找到的分析儀器和檢測手段,，測定你單位的原裝試劑成分,。稀釋液：K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-等的含量，PH值,，滲透壓等,。溶血?jiǎng)篕+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-,Br,NH3,SO32-等的含量，PH值,滲透壓,測定出溶血?jiǎng)┤芙饧t細(xì)胞的Hb光譜吸收曲線,。清潔劑：K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+,P,HCO3-,Br,NH3,SO32-等的含量,，PH值,滲透壓等.

1.2.1 試劑配制根據(jù)上面步驟的分析,和累積的試劑配方資料,推算出稀釋液的主要的緩沖體系和濃度并配給適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)成分,使配出的試劑在PH,滲透壓、導(dǎo)電性等方面與原裝稀釋液非常相近,，而后調(diào)入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。對于溶血?jiǎng)┮袛喑霰砻婊钚詣┑姆N類(可通過色譜儀或溶解紅細(xì)胞的Hb吸收曲線幫助判斷),并通過試驗(yàn)獲得表面活性劑的濃度.清潔劑用配制好的稀釋液加入適量的相關(guān)表面活性劑或成品洗滌劑構(gòu)成,要考慮對分析儀管道和感應(yīng)器的腐蝕情況.